BİYOKİMYASAL ANALİZDE KULLANILAN KROMATOGRAFİK YÖNTEMLER Prof. Dr. Emel EMREGÜLAnkara ÜniversitesiKimya BölümüKİM 443 ANALİTİK BİYOKİMYA

ElektroforezYüklü moleküllerin bir elektrik alanda değişik şekilde hareket (göç) etmeleri sonucu birbirinden ayrılmaları esasına dayanır. Yüklü bir parçacığın elektriksel alanda göçü elektriksel hareketlilik formülü ile verilir. µ: Elektriksel hareketlilik, birimi; cm2/volt.sV: Göç hızıE: Elektriksel alan şiddetiµ =VE

Elektrik alanda bir molekülün hareket hızı;Molekülün boyutuŞekliKimyasal yapısıElektrik gücüne bağlıdır. Amino asit, peptit, protein, nükleotit, nükleik asit gibi pek çok molekül iyonlaşabilen gruplar içermekte ve belli pH değerlerinde katyon veya anyon halinde bulunmaktadır. Elektroforezde, elektrik alanın etkisi ile bu yüklü tanecikler anoda veya katoda gider. Elektroforez üniteleri dikey (vertikal) ve yatay (horizontal) olmak üzere 2 tanedir.Dikey Jel sistemlerinde kullanılan poliakrilamid jeller proteinlerin ayrılmasında önemlidir.DNA analizinde agaroz jelleri daha çok yatay elektroforez ünitelerinde kullanılmaktadır.

İzolektrik fokuslama (IEF) Jel Elektroforezi• Proteinlerin izoelektrik noktasına göre ayrılması esasına dayanır. Jelde pH gradienti oluşturmak için izoelektrik noktaları belli, düşük molekül ağırlıklı amfolitler kullanılır. Belli pH aralıkları olan karışımlar şeklinde satılan bu maddeler, sentetik alifatik poliamino poli karboksilik asit yapısındadır. Ayırım, geniş bir pH aralığında (pH 3-10)

2D-Elektroforez (İki Boyutlu Elektroforez)• IEF ile SDS PAGE’i birleştiren tekniktir.1.Boyut: İzoelektrik odaklama İzoelektrik noktalarına göre 2.Boyut: SDS PAGE Büyüklüklerine göre ayrılırlar.