Sıra | DOSYA ADI | Format | Bağlantı |
---|---|---|---|
01. | Spermanin Uzun Süreli̇ Saklanmasi | pptx | Sunumu İndir |
Transkript
SPERMANIN UZUN SÜRELİ SAKLANMASI
UZUN SÜRELİ SAKLAMA (CRYOPRESERVATİON) Spermanın alınması ve muayenesi Sulandırma Gliserolizasyon ?? Paketleme Ekilibrasyon Dondurma Depolama Çözdürme Suni tohumlama
Sulandırma Sulandırma (sulandırma oranı, sıcaklık, pH, osmotik basınç) Tris Tes Pipes Bes Ticari (lasifos, biosifos) Katkı maddeleri external cryoprotektanlar Yumurta sarısı (%10-20) BSA (3-6 mg/ml) Soya proteini İnternal cryoprotektanlar DMSO DMA (%1-15) Gliserol Etilen glikol Antioksidanlar Vit e, a Taurin Heparin Hipotaurin Glikozaminoglikanlar Antibiyotikler Gentamisin, penisilin-streptomisin
Gliserolizasyon Sulandırıcının gliserollü kısmı ile sulandırmaGliserol (%1-15)Boğa için %7
PAKETLEME PELLET (0.1 ML) MİNİ PAYET (0.25, 0.50 ML) MAKROPAYET (2-5 ML) YASSI PAYET (2.5 ML) AMPUL VİAL TÜP
Ekilibrasyon (alışım) 4oC de 5 dakika ile 4 saat arasıboğa için 2 saatAmaç:Spermatozoonun sulandırıcıya alışmasıSıcaklığın düşürülmesiCryoprotektana alışım
Dondurma (cryopreservation)PELLET KURU BUZ (KATI CO2 , -79oC)PAYET SIVI AZOT BUHARI (-110-120oC PROGRAMLANABİLİR DONDURMA MAKİNASI Dondurma protokolleri Kuru buzda 5 dakika(-79oC) Sıvı azot buharında 10 dk (3 cm yükseklik, -120oC ) Farklı dondurma hızları (yavaş yada hızlı)
DEPOLAMA
SPERMANIN ÇÖZDÜRÜLMESİ PELETLERİN ÇÖZDÜRÜLMESİ Kendi Sulandırıcısı İçinde Aktivasyon Sıvısı İçinde PAYETLERİN ÇÖZDÜRÜLMESİ 37- 38OC de 15-30 saniye 40oC de 10 saniye 72oC de 5 saniye